定制AAV載體構建項目可以通過多種方式開展,我們的專業技術團隊可協助您進行設計。為了加快項目設計流程,建議您提前準備以下問題的相關信息:
您是否已有轉基因模板?如有,請將您的基因模板提供給我們進行驗證。
您是否希望在沒有模板的情況下過表達某個基因?如是,請提供基因編號、序列信息、宿主物種以及基因長度。
您是否希望構建用于基因表達調控的rAAV載體,如RNAi或CRISPR系統?如是,請提供目標基因編號、宿主物種以及基因長度。
您是否有特定的啟動子序列希望使用?
您是否希望使用特定的熒光標簽或報告基因?
您是否需要同時共表達多個轉基因?
您的轉基因總長度是否小于4.4kb?
請盡可能提供上述信息,以便我們為您量身定制最合適的AAV載體設計方案。
不同的AAV血清型是由其衣殼蛋白的氨基酸序列和三維結構差異所決定的,目前已發現或設計出的AAV血清型超過200種。rAAV衣殼蛋白在血清型上的差異會導致其在識別和結合細胞表面受體方面存在差異,從而影響其在不同組織和細胞類型中的感染效率。
派真生物的專業技術團隊可根據已有文獻中關于rAAV血清型感染效率的研究結果,結合我們的內部測試數據,協助您選擇最適合您實驗需求的血清型。然而,對于某些目標細胞類型或組織在文獻中尚缺乏充分研究的情況,我們建議可通過攜帶報告基因的預實驗來篩選并確定最理想的血清型。
rAAV基因組的包裝上限約為5Kb,其中包括兩端各145bp的ITR序列。因此,rAAV可容納的轉基因表達框約為4.5Kb。一個典型的rAAV轉基因表達框通常包括啟動子、目的基因以及終止信號。
派真生物的K104載體經過專門設計,旨在最大化目的基因的可用空間,采用了目前已知體內最小的哺乳動物啟動子miniCMV(180 bp)和短終止子區域(50 bp),因此該載體最多可容納長度為4.4Kb的目的基因。
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