慢病毒基因組進入細胞后，在細胞漿中反轉錄為DNA，形成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄成mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白或產生小RNA。慢病毒介導的基因表達或小RNA干擾作用持續且穩定，并隨細胞基因組的分裂而分裂(圖1)。

慢病毒包裝和侵染細胞的過程

慢病毒載體具有宿主范圍廣，免疫原性低，基因容量大，可以長期表達等特點。能夠有效地感染培養的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。

慢病毒的感染具有整合特性，能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上，達到持久性表達，因而可構建穩定細胞株，用于基因的細胞功能研究。借助慢病毒載體改造T細胞可用于CAR-T細胞治療。

慢病毒包裝與純化

慢病毒包裝采用三質粒或四質粒系統進行包裝，收集細胞培養上清，通過超速離心濃縮純化和收集病毒。

慢病毒滴度檢測

檢測方法：定量PCR檢測感染后細胞基因組中外源DNA拷貝數

實驗原理：慢病毒介導外源基因以逆轉錄方式整合進目的細胞基因組

慢病毒載體優勢

①?表達時間長：慢病毒可將外源基因整合到宿主細胞基因組上，實現基因長時間穩定的表達，不隨細胞分裂傳代而丟失，是細胞實驗的首選，常用于構建穩定株。

② 安全性高：未發現致病性，慢病毒載體改造T細胞用于CAR-T細胞治療。

③ 免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應，適用于動物實驗。