派真生物?可提供多種規(guī)模的一次發(fā)酵，包括?2?L、7?L、25?L、50?L 和?200?L。不同發(fā)酵體積的?AAV?產(chǎn)量因血清型而異。以中—高產(chǎn)型的?AAV9?為例，其預(yù)期產(chǎn)量如下：

派真生物的?h293?細(xì)胞庫已獲正式商業(yè)使用授權(quán)。

基因治療所用試劑必須符合?CDE?發(fā)布的法規(guī)要求。按照該標(biāo)準(zhǔn)，支原體和細(xì)菌內(nèi)毒素檢測為必檢項目。

可見異物可通過目視檢測識別。《藥典》通則?0904 規(guī)定，在規(guī)定光照及背景條件下，應(yīng)對注射劑、眼用液體制劑及無菌原料藥進(jìn)行目視檢查。可見異物通常源自粒徑或長度 大于?50?μm 的不溶性顆粒。

不溶性微粒粒徑在 10–50?μm 范圍內(nèi)，肉眼無法分辨，需借助儀器檢測，常用設(shè)備為不溶性微粒分析儀。《藥典》通則?0903 規(guī)定，可根據(jù)項目性質(zhì)，對擬靜脈給藥制劑（注射液、無菌注射用粉末、注射用濃溶液等）檢測微粒的粒徑和數(shù)量。

“rcAAV”指具備復(fù)制能力的腺相關(guān)病毒（replication?competent?AAV）。絕大多數(shù)?rAAV?載體已被設(shè)計為復(fù)制缺陷型，因此成品中不應(yīng)含有?rcAAV。法規(guī)要求?GMP?級?rAAV?產(chǎn)品的復(fù)制能力必須控制在幾乎不可檢測的水平。

rAAV?感染能否成功驅(qū)動轉(zhuǎn)基因表達(dá)，除了取決于 DNA?載體本身的功能，還受多種其他因素的影響。因此，建議對所有已包裝的?rAAV?進(jìn)行獨立的轉(zhuǎn)基因表達(dá)驗證。

鑒于?rAAV?不整合于宿主基因組，其感染滴度通常采用 TCID??（半數(shù)組織培養(yǎng)感染量） 標(biāo)準(zhǔn)方法測定。具體步驟如下：

1. 將?rAAV?樣品按梯度稀釋后接種?H5?細(xì)胞，統(tǒng)計各稀釋度的感染率；

2. 隨后通過?qPCR?檢測?rAAV?基因組拷貝數(shù)，以最終確定感染滴度。

SDS?PAGE 可用于鑒定?rAAV?衣殼蛋白，同時也能直接檢測特定蛋白雜質(zhì)，包括宿主蛋白、BSA（牛血清白蛋白）或降解的?AAV?衣殼蛋白。